轉(zhuǎn)染是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程,從本質(zhì)上講和轉(zhuǎn)化沒有根本的區(qū)別。
轉(zhuǎn)染是什么意思
轉(zhuǎn)染可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在,盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高,外源DNA整合到染色體中概率很小,通常需要通過一些選擇性標記反復篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。
無論是轉(zhuǎn)染還是轉(zhuǎn)化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進入細胞內(nèi)部。
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